Флуоресцентната микроскопия революционизира способността ни да визуализираме и изучаваме биологични образци, позволявайки ни да се потопим в сложния свят на клетките и молекулите. Ключов компонент на флуоресцентната микроскопия е източникът на светлина, използван за възбуждане на флуоресцентни молекули в пробата. През годините са използвани различни източници на светлина, всеки със своите уникални характеристики и предимства.
1. Живачна лампа
Живачната лампа с високо налягане, варираща от 50 до 200 вата, е изработена от кварцово стъкло и е със сферична форма. Съдържа известно количество живак вътре. Когато работи, възниква разряд между два електрода, което води до изпаряване на живака и вътрешното налягане в сферата бързо се увеличава. Този процес обикновено отнема около 5 до 15 минути.
Излъчването на живачната лампа с високо налягане е резултат от разпадането и редуцирането на живачните молекули по време на електродния разряд, което води до излъчване на светлинни фотони.
Той излъчва силна ултравиолетова и синьо-виолетова светлина, което го прави подходящ за възбуждане на различни флуоресцентни материали, поради което се използва широко във флуоресцентната микроскопия.
2. Ксенонови лампи
Друг често използван източник на бяла светлина във флуоресцентната микроскопия е ксенонова лампа. Ксеноновите лампи, подобно на живачните лампи, осигуряват широк спектър от дължини на вълните от ултравиолетови до почти инфрачервени. Те обаче се различават по своите спектри на възбуждане.
Живачните лампи концентрират емисиите си в близките ултравиолетови, сини и зелени области, което осигурява генерирането на ярки флуоресцентни сигнали, но идва със силна фототоксичност. Следователно лампите HBO обикновено са запазени за фиксирани проби или слабо флуоресцентно изображение. Обратно, източниците на ксенонови лампи имат по-плавен профил на възбуждане, което позволява сравнения на интензитета при различни дължини на вълната. Тази характеристика е изгодна за приложения като измерване на концентрацията на калциеви йони. Ксеноновите лампи също показват силно възбуждане в близкия инфрачервен диапазон, особено около 800-1000 nm.
Лампите XBO имат следните предимства пред лампите HBO:
① По-равномерен спектрален интензитет
② По-силен спектрален интензитет в инфрачервената и средната инфрачервена област
③ По-голяма мощност на енергия, което улеснява достигането на блендата на обектива.
3. Светодиоди
През последните години се появи нов претендент в сферата на източниците на светлина за флуоресцентна микроскопия: светодиодите. Светодиодите предлагат предимството на бързото включване и изключване за милисекунди, намалявайки времето на излагане на пробите и удължавайки живота на деликатните проби. Освен това, LED светлината показва бързо и точно затихване, което значително намалява фототоксичността по време на дългосрочни експерименти с живи клетки.
В сравнение с източниците на бяла светлина, светодиодите обикновено излъчват в по-тесен спектър на възбуждане. Налични са обаче множество LED ленти, позволяващи многостранни многоцветни флуоресцентни приложения, което прави светодиодите все по-популярен избор в съвременните настройки за флуоресцентна микроскопия.
4. Лазерен източник на светлина
Източниците на лазерна светлина са силно монохроматични и насочени, което ги прави идеални за микроскопия с висока разделителна способност, включително техники със супер разделителна способност като STED (стимулирано намаляване на емисиите) и PALM (фотоактивирана локализираща микроскопия). Лазерната светлина обикновено се избира така, че да съответства на специфичната дължина на вълната на възбуждане, необходима за целевия флуорофор, осигурявайки висока селективност и прецизност при възбуждане на флуоресценция.
Изборът на източник на светлина за флуоресцентен микроскоп зависи от специфичните експериментални изисквания и характеристиките на пробата. Моля, не се колебайте да се свържете с нас, ако имате нужда от помощ
Време на публикуване: 13 септември 2023 г